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      細胞培養基常見問題,谷氨酰胺、雙抗和丙酮酸鈉的作用

      發布時間: 2023-06-19  點擊次數: 358次
        細胞培養基常見問題,谷氨酰胺、雙抗和丙酮酸鈉的作用
        細胞培養基是細胞培養中最基礎也是最不可缺少的環節,如果細胞狀態不好,后續試驗將無法進行。讓我們看看細胞培養基會出現的常見問題:
        如何選用培養基?
        參考以往論文,或咨詢細胞株供應商
        根據實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選RPMI-1640;肉瘤、淋巴細胞實驗,可選McCoy’s 5A;造血細胞培養可用Fischer’s培養基。
        用多種培養基培養目的細胞,通過生長狀態、生長曲線、集落形成率等指標選擇最佳培養基。
        美國菌種保藏中心ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。輸入細胞名稱就可以查詢到細胞的具體來源、培養體系和注意事項等,此外還提供專業的細胞培養指南供細胞培養者學習。此外,還可通過Expasy、DSMZ等細胞數據庫查找信息。
        培養基要避光保存?
        培養基瓶上都會標注避光保存,因為培養基中的某些成分遇光會產生過氧化氫,具有細胞毒性。我們在超凈臺中處理細胞時,因為時間較短,不會產生太大問題。但是長時間光照下,會造成培養基質量的下降。
        液體培養基可以放冷凍保存嗎?
        不可以,培養基應保存在4℃冰箱中。在-20℃下,培養基中的鹽容易析出。融化后,有的鹽可能無法重新溶解,出現滲透壓降低,顏色會變深,PH值升高。
        培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
        新鮮培養基中添加血清和抗生素,應在兩到三周內使用。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后開始降解。
        培養液pH是怎樣影響細胞生長的?
        大多數細胞適宜pH值為7.2-7.4,各種細胞對pH值要求也各不相同,原代細胞培養對PH值變動耐受差,無限細胞系耐受力強。
        培養基中的HEPES是一種優良的生物緩沖劑,對細胞無毒性作用,能夠較長時間保持恒定的pH范圍,防止培養液pH波動較大對細胞生長產生不利的影響。
        培養基中的NaHCO3 與二氧化碳形成緩沖系統,保持培養基PH值穩定。所有的干粉培養基都不含NaHCO3 ,加水溶解后添加NaHCO3。
        為什么有客戶要求培養基中不含酚紅?
        酚紅作為pH指示劑,中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。
        但研究表明酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用,因此在涉及雌激素敏感的細胞時(如乳腺組織),最好使用不含酚紅的培養基。此外,酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測;部分無血清培養基中的酚紅會干擾鈉-鉀平衡。
        谷氨酰胺的作用?
        是細胞培養中所必需的一種營養元素。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和能量代謝。谷氨酰胺在溶液中很不穩定,會自發降解生成氨和焦谷氨酸,其中氨對細胞有害。
        L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,是一種高級細胞培養添加劑,可直接替代細胞培養基中的L-谷氨酰胺。
        雙抗的作用?
        青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,預防微生物污染最常用的抗生素。其中,青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結合,抑制細菌蛋白質的合成,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯合使用可以預防絕大部分的細菌污染。
        丙酮酸鈉的作用?
        丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。善義舉。華晨陽將持續關注疫情形勢和防控工作需要,弘揚愛心善舉,為疫情防控貢獻新力量。




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